trypsin edta cellekulturprotokol

Procedure

1. Fjern medium fra kulturbeholderen ved aspiration og vask monolaget med en saltopløsning fri for Ca²⁺ og Mg²⁺ for at fjerne alle spor af serum. ...
2. Dispenser nok trypsin eller trypsin / EDTA-opløsning i kulturbeholder (er) til fuldstændigt at dække monolaget af celler og anbring i 37 ° C inkubator i ~ 2 minutter.

1. Hvordan forbereder du trypsin EDTA-opløsning til cellekultur?
2. Hvorfor trypsin EDTA anvendes i cellekultur?
3. Hvordan udføres subkulturelle adhærente celler ved hjælp af trypsin EDTA og EDTA alene?
4. Hvordan optøer du trypsin EDTA?
5. Kan trypsin dræbe celler?
6. Hvad kan vi føje til kulturen for at hæmme trypsin?
7. Kan EDTA dræbe celler?
8. Hvorfor hæmmer serum trypsin?
9. Er EDTA giftig for celler?
10. Hvorfor bruger vi trypsin?
11. Hvorfor vasker du celler med PBS?
12. Hvorfor vasker du cellerne med PBS, før du tilsætter trypsin?

Hvordan forbereder du trypsin EDTA-opløsning til cellekultur?

Tilsæt 12 til 15 ml friske cellekulturmedier til en ny kolbe og ækvilibrer dette medium til den passende pH og temperatur. Saml cellesuspensionen, tæl og / eller del den, og dispensér cellerne i den nyligt forberedte kolbe. Se cellelinjeproduktarket for anbefalede forhold til subdyrkning.

Hvorfor trypsin EDTA anvendes i cellekultur?

EDTA fungerer som en metalchelator, der tilsættes til trypsinopløsninger for at øge aktiviteten. EDTA tilsættes for at fjerne calcium og magnesium fra celleoverfladen, hvilket tillader trypsin at hydrolysere specifikke peptidbindinger. Hovedårsagen til at bruge EDTA sammen med trypsin er at fjerne celle til celle adhæsion.

Hvordan udføres subkultur af adhærente celler ved hjælp af trypsin EDTA og EDTA alene?

Pipetter trypsin / EDTA på det vaskede celle-monolag med ca. 1 ml pr. 25 cm2 overfladeareal. Drej kolben for at dække monolaget med trypsin. Dekanter det overskydende trypsin. Sæt kolben tilbage i inkubatoren, og lad den stå i 2-10 minutter.

Hvordan optøer du trypsin EDTA?

Fjern trypsin / EDTA-opløsningen fra opbevaring og anbring den natten over ved 2 ° C til 8 ° C. 2. Overfør flasken til et 37 ° C vandbad, og omrør forsigtigt flasken for at blande opløste stoffer. Opbevar ikke trypsin / EDTA-opløsning længere end 37 ° C.

Kan trypsin dræbe celler?

Inkubering af celler med for høj trypsinkoncentration i for lang tid vil beskadige cellemembraner og dræbe cellerne.

Hvad kan vi føje til kulturen for at hæmme trypsin?

Trypsin hæmmes af serum, der tilvejebringer de divalente kationer som calcium og magnesium, som spiller en rolle i både intra- og intercellulær signalproces, dvs. dannelse af CAM'er, så serum tilsættes normalt til beholderen, når cellerne er løsrevet - dette kan bekræftes ved observation under en mikroskop.

Kan EDTA dræbe celler?

en. Brug 5 mM EDTA eller højere BEMÆRK: for meget EDTA kan dræbe dine celler b. Accutase og Accumax er celledissociationsprodukter, der sælges af Innovative Technologies, som kan hjælpe med at opretholde enkeltcellessuspensioner.

Hvorfor hæmmer serum trypsin?

Hej, Trypsin er en endopeptidase, der fordøjer proteiner. I trypsiniseringsprocessen fordøjes ekstracellulære proteiner, hvilket fører til frigørelse af cellerne fra bunden af ​​kulturbeholderen. ... Serum indeholder mange proteasehæmmere, som stopper trypsin, for det meste alfa-1-antitrypsin. Håber dette hjælper!

Er EDTA giftig for celler?

Ingen toksicitet blev observeret, når celler blev eksponeret for 100 mikroM Zn- eller Fe-EDTA, men den samme koncentration af Cu-EDTA var så giftig som Na-EDTA. Kontinuerlig eksponering af cellekulturerne for 5 mikroM Na- eller Zn-EDTA i op til 7 uger gav ingen indikationer for toksicitet.

Hvorfor bruger vi trypsin?

Trypsin er et enzym, der hjælper os med at fordøje protein. I tyndtarmen nedbryder trypsin proteiner og fortsætter fordøjelsesprocessen, der begyndte i maven. Det kan også omtales som et proteolytisk enzym eller proteinase. Trypsin produceres af bugspytkirtlen i en inaktiv form kaldet trypsinogen.

Hvorfor vasker du celler med PBS?

I cellekultur under spilitting er det nødvendigt med PBS-vask for at fjerne mediaserumet, så trypsin er i stand til at løsne cellerne fra pladen, på anden vis kan serum inaktivere trypsinet.

Hvorfor vasker du cellerne med PBS, før du tilsætter trypsin?

Før du føjer det til cellerne, skal du vaske cellekulturmediet væk, da trypsin også ville nedbryde proteiner, der er til stede i mediet, som FCS, hvilket reducerer dets aktivitet, før det når cellerne.