Forskellen mellem nitrocellulose og PVDF

Mens både nitrocellulose- og PVDF-membraner anvendes til Western blotting og aminosyreanalyse, er nitrocellulose ideel til påvisning af proteiner med lav molekylvægt, mens PVDF er mere egnet til påvisning af proteiner med højere molekylvægt.

1. Hvad er forskellen mellem PVDF og nitrocellulosemembraner?
2. Hvad er fordele og ulemper ved PVDF og nitrocellulose?
3. Hvorfor bruges nitrocellulose i Western blot?
4. Hvad er en PVDF-membran?
5. Hvad står PVDF for?
6. Hvorfor lægger du PVDF-membran i blød i methanol?
7. Hvordan opbevarer du PVDF-membraner?
8. Kan protein passere gennem PVDF-membran?
9. Hvordan aktiverer man nitrocellulosemembranen?
10. Hvorfor bruges glycin i kørende buffer?
11. Hvad er porestørrelsen af ​​nitrocellulose?
12. Hvad er princippet om Western blot?

Hvad er forskellen mellem PVDF og nitrocellulosemembraner?

PVDF-membraner har en højere proteinbindende kapacitet end nitrocellulose. Den proteinbindende kapacitet af PVDF ligger i området fra 150-200 µg protein / cm² og nitrocellulose er i området fra 80-100 µg protein / cm². Selvom PVDF har en højere bindingskapacitet, kan det under visse omstændigheder resultere i øget baggrund.

Hvad er fordele og ulemper ved PVDF og nitrocellulose?

3. Hvad er fordele og ulemper ved PVDF og nitrocellulose? PVDF er en stærkt ikke-reaktiv plast, der immobiliserer proteiner baseret på dets ikke-specifikke affinitet for aminosyrer. PVDF foretrækkes frem for nitrocellulose, fordi det giver bedre proteinretention, styrke og kemisk kompatibilitet.

Hvorfor bruges nitrocellulose i Western blot?

Nitrocellulosemembraner er en populær matrix, der anvendes i proteinblotting på grund af deres høje proteinbindingsaffinitet, kompatibilitet med en række påvisningsmetoder (kemiluminescens, kromogen og fluorescens) og evnen til at immobilisere proteiner, glykoproteiner eller nukleinsyrer.

Hvad er en PVDF-membran?

Polyvinylidenfluorid (PVDF) membraner binder biomolekyler gennem hydrofobe interaktioner. Membranporer øger overfladebindingsarealet, mens størrelsen af ​​bundne proteiner begrænses. ... Det har en højere proteinbindingsevne og en højere retention end 0,45 µm membraner.

Hvad står PVDF for?

PVDF er forkortelsen for polyvinylidenfluorid, som også kan kaldes PVF2. Denne polymer er en del af en klasse af materialer kendt som fluorcarboner eller fluorpolymerer, som er kendetegnet ved høj termisk stabilitet og fremragende kemisk resistens.

Hvorfor lægger du PVDF-membran i blød i methanol?

En kort skylning (15-30 sekunder) i methanol (eller anden 100% alkohol (ethanol eller isopropanol)) før vestlig overførsel vil "hydrere" membranen og tillade forbedret overførsel og proteinbinding. Nitrocellulosemembraner er hydrofile, så de kan hydratiseres fuldstændigt af vandige buffere.

Hvordan opbevarer du PVDF-membraner?

For at opbevare proteinoverført NC- eller PVDF-membran i længere tid er det bedre at tørre membranen og derefter holde på -20^oC uden foldning. Til PVDF-membran skal du bare skylle i methanol, før du blottes.

Kan protein passere gennem PVDF-membran?

Indledende overførsel udført natten over (16 timer) ved 30 V mislykkedes, fordi små og mellemstore proteiner (mindre end 100 kDa) overførtes lige gennem membranen (som det fremgår af Ponceau-farvning af blot og Coomassie-farvning af gelen).

Hvordan aktiverer man nitrocellulosemembranen?

De nævnte, at: Nitrocellulose — Placer membranen direkte i en lav skål indeholdende 50 ml 1X Transfer Buffer i flere minutter. Filterpapir - Blød filterpapiret i blød i 1X Transfer Buffer umiddelbart inden brug. Gel — Brug gelen straks efter kørslen.

Hvorfor bruges glycin i kørende buffer?

Glycin er i kørebufferen, som typisk har en pH-værdi på 8,3. ... Når et elektrisk felt påføres, rammer glycinanioner pH 6,8 stablingsbufferen og skifter til at blive mest neutralt ladede glycinzwitterioner. Det betyder, at de bevæger sig langsomt gennem stabellaget mod anoden på grund af deres manglende ladning.

Hvad er porestørrelsen af ​​nitrocellulose?

Bio-Rads 0,2 µm porestørrelse nitrocellulosemembran er tæt 100% nitrocellulose. Ren nitrocellulose er den hyppigst anvendte membran til overførsel af både proteiner og nukleinsyrer.

Hvad er princippet om Western blot?

Western blotting (protein blotting eller immunoblotting) er en hurtig og følsom analyse til påvisning og karakterisering af proteiner. Det er baseret på immunochromatografiprincippet, hvor proteiner adskilles i polyacrylamidgel i henhold til deres molekylvægt.